【前情回顾】Cas9蛋白定量检测试剂盒解决方案

说起DNA编辑，你会想到CRISPR/Cas9，那RNA编辑呢？今天就带大家认识一下RNA剪刀手CRISPR/Cas13a。

2017年10月，张锋实验室首先证实CRISPR/Casl3a可靶向编辑哺乳动物体内RNA。比起RNAi，Casl3a有着更强的特异性，并且由于其对哺乳动物细胞而言是非内源性的，因此扰乱细胞中天然的转录后网络的可能性极低。大家都知道，Cas9是利用tracrRNA和crRNA来实现与DNA目标的结合和切割。不过，Cas13a（也叫C2c2）只需要24个碱基的crRNA，它通过富含尿嘧啶的茎环结构与Cas13a分子相互作用，并通过Cas13a的一系列构象变化来促进RNA目标的切割。

Cas13a是VI型CRISPR-Cas系统效应蛋白，具有RNA介导的RNA酶切活性能靶向并切割与crRNA互补的RNA，该编辑系统作为一种新兴的治疗和诊断工具，在病毒性疾病和癌症等领域受到越来越多的关注。

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Cas13a 蛋白ELSIA检测试剂盒实验结果：

图1. Cas13a标准曲线

图2. 纯化的Cas13a重组蛋白。 泳道 1：SeeBlue Plus2 MW 标准品； 泳道2：重组的Cas13a蛋白。

重组的Cas13a蛋白的序列（下划线部分是用来免疫生产试剂盒抗体的序列）：

MGNLFGHKRWYEVRDKKDFKIKRKVKVKRNYDGNKYILNINENNNKEKIDNNKFIRKYINYKKNDNIL KEFTRKFHAGNILFKLKGKEGIIRIENNDDFLETEEVVLYIEAYGKSEKLKALGITKKKIIDEAIRQG ITKDDKKIEIKRQENEEEIEIDIRDEYTNKTLNDCSIILRIIENDELETKKSIYEIFKNINMSLYKII EKIIENETEKVFENRYYEEHLREKLLKDDKIDVILTNFMEIREKIKSNLEILGFVKFYLNVGGDKKKS KNKKMLVEKILNINVDLTVEDIADFVIKELEFWNITKRIEKVKKVNNEFLEKRRNRTYIKSYVLLDKH EKFKIERENKKDKIVKFFVENIKNNSIKEKIEKILAEFKIDELIKKLEKELKKGNCDTEIFGIFKKHY KVNFDSKKFSKKSDEEKELYKIIYRYLKGRIEKILVNEQKVRLKKMEKIEIEKILNESILSEKILKRV KQYTLEHIMYLGKLRHNDIDMTTVNTDDFSRLHAKEELDLELITFFASTNMELNKIFSRENINNDENI DFFGGDREKNYVLDKKILNSKIKIIRDLDFIDNKNNITNNFIRKFTKIGTNERNRILHAISKERDLQG TQDDYNKVINIIQNLKISDEEVSKALNLDVVFKDKKNIITKINDIKISEENNNDIKYLPSFSKVLPEI LNLYRNNPKNEPFDTIETEKIVLNALIYVNKELYKKLILEDDLEENESKNIFLQELKKTLGNIDEIDE NIIENYYKNAQISASKGNNKAIKKYQKKVIECYIGYLRKNYEELFDFSDFKMNIQEIKKQIKDINDNK TYERITVKTSDKTIVINDDFEYIISIFALLNSNAVINKIRNRFFATSVWLNTSEYQNIIDILDEIMQL NTLRNECITENWNLNLEEFIQKMKEIEKDFDDFKIQTKKEIFNNYYEDIKNNILTEFKDDINGCDVLE KKLEKIVIFDDETKFEIDKKSNILQDEQRKLSNINKKDLKKKVDQYIKDKDQEIKSKILCRIIFNSDF LKKYKKEIDNLIEDMESENENKFQEIYYPKERKNELYIYKKNLFLNIGNPNFDKIYGLISNDIKMADA KFLFNIDGKNIRKNKISEIDAILKNLNDKLNGYSKEYKEKYIKKLKENDDFFAKNIQNKNYKSFEKDY NRVSEYKKIRDLVEFNYLNKIESYLIDINWKLAIQMARFERDMHYIVNGLRELGIIKLSGYNTGISRA YPKRNGSDGFYTTTAYYKFFDEESYKKFEKICYGFGIDLSENSEINKPENESIRNYISHFYIVRNPFA DYSIAEQIDRVSNLLSYSTRYNNSTYASVFEVFKKDVNLDYDELKKKFKLIGNNDILERLMKPKKVSV LELESYNSDYIKNLIIELLTKIENTNDTL

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